北京欧林格生物科技有限公司

支原检测试剂盒

产品描述

支原体污染是细胞培养领域的一个普遍性问题，实验室细胞系支原体污染的平均比例为30-60%。支原体直径约为0.1-0.3μm，且具有变形能力，可透过常见的过滤头（0.22-0.45 μm），因此常规的过滤除菌的方法不能将其去除，细胞常用的抗生素（青霉素、链霉素）也对支原体无效。

支原体可通过细胞系之间交叉污染，操作人员的口腔、皮肤造成污染，或者血清等添加物而带入污染。支原体无法通过常规的光学显微镜观察到，不会引起培养基混浊，因此细胞被支原体污染一般难以察觉。

使用荧光染料进行DNA荧光染色，用支原体rRNA特异性的探针进行杂交，ELIAS检测，PCR等。这些方法中，PCR是简便灵敏的

本制品通过PCR方法检测培养细胞等生物材料中的支原体，所用引物为根据支原体 16S-23S rRNA 序列保守区域设计，只特异性扩增支原体DNA，检出灵敏度与特异性均较高。PCR 扩增及电泳分析只需数个小时，操作方便简单

产品组分

使用方法

细胞培养3-6天后，直接取其上清液进行PCR检测。为排除细胞培养基中蛋白抑制PCR反应，模板体积不超过PCR反应体系的1/20。根据PCR产物电泳的结果来判断是否有支原体污染。

1. 充分溶解PCR mix 按照如下表格配置PCR反应液：

2. PCR反应条件：

94℃    5 min

94℃    30 S

58℃    30 S        30-35 cycles

72℃    30 S

72℃    7 min

反应结束后，取10μL的PCR反应液（不需要加loading buffer）直接进行1-1.5%琼脂糖凝胶电泳，确认PCR扩增产物。

运输与保存方法

冰袋运输。

-80℃保存，保质期18个月。若较长时间不用，请避光保存。

注意事项

• 使用本试剂前请仔细阅读说明书；
• 规范操作，包括反应体系的配制、样本处理及加样等；
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴口罩及一次性手套操作；
• 本产品仅供研究使用，不得用于诊断或治疗。