首页 -> 相关的试剂 -> lipX plus 转染试剂
货号 | 包装 | 价格 |
oligo1002 -1ml | 1ml | 1200元 |
oligo1002-1.5ml | 1.5ml | 1500元 |
冰袋运输,4℃存放一年以上。
下列步骤适用于24孔板培养的哺乳动物细胞,至于其他培养材料,请参考转染规模调整,所有数量和体积均是按孔计算。大部分细胞系所使用的DNA(ug)与LipoX Plus Reagent(uL)的比值为1:2到1:3,转染高密度细胞可获得高转染效率、高表达水平和低细胞毒性。
A.贴壁细胞:转染前一天每孔0.5-2×105个细胞接种于500ul不含抗生素的培养基中,在转染时细胞可长至 70-90%汇合度。
悬浮细胞:在配制转染液前每孔4-8×105个细胞接种于500ul不含抗生素的培养基中。
B.转染液制备,每孔细胞用量如下:
①用50ulOpti-MEM低血清培养基(或者其他无血清培基)稀释质粒DNA,轻轻混匀。
②使用前轻轻摇匀LipoX Plus Reagent,然后取适量LipoX Plus在50ul Opti-MEM培养基中稀释,室温孵育5min。
注意:请在 25 min 内进行下一步操作。
③将前两步所稀释的 DNA 和LipoX Plus Reagent混合(使总体积为 100 ul),轻轻混匀, 室温放置 20 min(溶液可出现浊)。
注意:转染复合物常温下可在 6 h 内保持稳定。
C.在每孔细胞中加入100 ul转染液。
D.按照1:1000的比例加入转染增强液,轻轻摇匀。
E.37℃培养18-48 h后检测基因表达,转染4-6 h后可更换培养基。
培养材料 | 接种培养基 | 稀释用Opti-M EM |
DNA(DNA转染) |
Lipo(DNA转染) |
96孔板 | 100uL | 2×25 ul |
0.2 μg |
0.5 ul |
24孔板 | 500 ul | 2×50 ul |
0.8 μg |
2.0 ul |
12孔板 | 1mL | 2×100 ul |
1.6 μg |
4.0 ul |
6孔板 | 2mL | 2×250 ul |
4.0 μg |
10 ul |
60mm | 5mL | 2×0.5 m L | 8.0 μg |
20 ul |
10cm | 15mL | 2×1.5 m L | 24 μg |
60 ul |
1.使用高纯度的DNA 或RNA有助于获得较高的转染效率。
2.转染前细胞必须处于良好的生长状态。
3.需自备不含抗生素的无血清培养液或 Opti-MEM®培养液或普通的DMEM培养液。
4.LipoX Plus Reagent转染试剂不能vortex 或离心,宜缓慢晃动混匀。
5.LipoX Plus Reagent转染试剂使用后请立即盖好盖子,避免长时间暴露在空气中,影响转染效率。
6.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。