转座子稳转细胞株构建

DNA转座子技术：在自然界中，DNA转座子系统包含转座酶，该酶负责识别并催化转座子在基因组中的移动，其编码序列两端具有末端反向重复序列（TRs）。转座酶可在TRs位点和基因组位点引入双链断裂，从而使整个转座子区域发生转位。对于基因编辑应用，可以将转座酶组分进行分离，一个辅助质粒：编码转座酶；一个转座子质粒：含优化的两端TRs，中间是被转座区域，可插入我们想转座到宿主基因组中的目的基因序列。常用的转座系统包括：PiggyBac、睡美人（Sleeping Beauty）和Tol2，其特点见下表。

其中，PiggyBac是最受欢迎的转座子系统之一，可用于递送转基因、shRNA、重组抗体等。PiggyBac转座子在发现后经过了一系列优化和改造，优化后的转座酶（hyPBase）使转座效率进一步提高，具有剪切活性但是整合活性缺失，确保在移除整合的序列后，该位置不会再次被转座子重新插入，实现无痕剪切。此外，PiggyBac转座子的一个显著优势在于其大装载量，可以在5’和3’ TR之间携带长达27 kb的DNA。PiggyBac转座子介导基因整合时会在染色体TTAA位点切割DNA，并且优先选择基因内区域。