| 名称: | pETDuet-GZMB(human)-EGFP-pCadC-Holin-II(ecoli)-mCherry-6×His |
|---|---|
| 别称: | NM_004131.6;C11; CCPI; CGL-1; CGL1; CSP-B; CSPB; CTLA1;CTSGL1; HLP; SECT |
| 基因长: | 741bp |
| 质粒宿主： | 大肠杆菌 |
| 质粒用途： | 蛋白表达 |
| 片段类型： | ORF |
| 片段物种： | 人,大肠杆菌 |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | |
| 荧光标记： | 绿色,红色 |
| 启动子: | T7 |
| 复制子: | pBR322 |
| 拷贝数: | |
| 感受态: | DH5a |
| 温度: | 37度 |
| 背景载体: | pETDuet-1 |
| 正向引物: | pEGFP-C-5' |
| 反向引物: | |
| 诱导方式: |
操作说明
一、质粒干粉（负20度保存，保质期90天，常温运输）
1、收到干粉质粒后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒；
2、将相应的感受态于冰盒上解冻，取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴 30min；
3、42度热激60s，冰浴2min，加入900μl无抗LB培养基，180rpm震荡培养45min；
4、6000rpm离心3min，留100μl上清重悬，再涂至对应抗性的LB平板上；
5、倒置培养过夜后，如菌落过多则稀释质粒转化，如没有菌落则取10ul质粒转化；
6、挑单菌落至对应抗性的LB液体培养基中过夜震荡培养，根据需要提取质粒。
二、液体质粒（负20度保存，保质期90天，冰袋运输）
1、收到液体质粒后请甩动保存管，让液体质粒不要吸附在管壁上；
2、根据实验需求取适量质粒，其余保存于负20度冰箱。
三、甘油菌种（负80度保存，保质期90天，冰袋运输）
1、收到甘油菌种后请甩动保存管，让菌液不要吸附在管壁上；
2、用接种环在固体平板上四区划线，如有抗性就加对应抗性；
3、恒温培养箱倒置培养12~16h；
4、务必挑取单菌落接种于液体培养基中，如有抗性就加对应抗性；
5、摇床震荡培养过夜，根据实验需要培养菌种。
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CCGAAGTGGC
GAGCCCGATC
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CGATATAGGC
GCCAGCAACC
GCACCTGTGG
CGCCGGTGAT
GCCGGCCACG
ATGCGTCCGG
CGTAGAGGAT
CGAGATCGAT
CTCGATCCCG
CGAAATTAAT
ACGACTCACT
ATA
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