北京欧林格生物科技有限公司

三保一敲减套餐(及经验总结)


siRNA套餐价格(HPLC纯化 良心价)

产品说明

规      格

纯化方式

目的基因的siRNA oligos

3靶点

2 OD

HPLC

阴性对照siRNA oligos

1条

1 OD

HPLC

FAM标记阴性对照siRNA oligos

1条

1 OD

HPLC

RNAi阳性对照siRNA oligos

1条

1 OD

HPLC

套餐价格

1500



 

 

 

 

 

 

 

 

常见问题

实验问题

原因

推荐解决方法

  siRNA转染靶细胞后qPCR检测干扰效果不佳?

1)转染效率低

      2)本底表达丰度过

   3)转染条件不佳

  1)  调整细胞状态,选择合适的转染试剂,可使用NC-FAM优化转染条件,转染效率要求在80%以上,转染效率低的考虑用慢病毒或腺病毒介导。

  2)本底表达丰度过低干扰效果会很不明显。建议更换细胞筛选靶点3)调整siRNA质粒与转染试剂的比例。

 

  siRNA转染靶细胞后WB检测干扰效果不佳?

 

 

         靶蛋白的半衰期长

 

 

   延长干扰时间或改用病毒介导或进行稳转筛选。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

                                  

 

1)本底表达检测:强烈建议做RNAi实验之前做一下目的基因的本底表达的检测,如果细胞内目的基因的表达量本身就非常低,不用敲就非常

非常低的基因,还要做RNAi?CT值30以上的基因几乎就不表达,就不要做RNAi实验了,去做过表达啊

2)关于筛选:根据我司多年的经验,对于大部分的细胞,第一次筛选可以在12孔板,设置50nM的终浓度,转染三条siRNA和对照做筛选。

初筛没必要用太多量的细胞(有同学直接在6cm 皿里筛选,多浪费啊),也不用设置太多的浓度梯度和时间点等条件去优化。

如果第一轮靶点敲减效率达不到50%,可以再根据第一轮的实验结果,以敲减效率最高的靶点,进行浓度/收样时间/转染试剂比例

等条件去优化。

3)关于阳参:阳参的siRNA片段,是我司验证的已经文献支持的靶点序列。不做多解释。

对于第一次做RNAi实验的同学,可以拿阳参练手。把细胞培养,转染,定量等体系过一遍再去做正式实验。

因为你很可能细胞养的很挫,转染试剂不合适,RNA抽提不好,反转录定量的体系不好,,,,,,别一遇到结果不好就去怪试剂

 先找找自己实验体系的原因。

4)关于转染 :买个好的转染试剂。RNAimax/lipo3000/fugene等等,国内的暂时没有遇到好用的,如果有可以推荐给我。

 

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基因合成,亚克隆构建,3‘UTR验证实验

启动子合成及验证,慢病毒包装

腺病毒包装。腺相关病毒包装

稳转株构建

 

 

 


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