BRDU
5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU），是人工合成的胸腺嘧啶（thymidine）类似物，在DNA合成期（S期），BrdU能够代替胸腺嘧啶而渗入正在复制的DNA分子中，然后用荧光标记的BrdU抗体进行染色，就可以对细胞增殖进行检测.
实验材料及仪器：
BrdU为 Sigma 公司产品，小鼠抗BrdU单克隆抗体为Invitrogen 公司产品，H2O2，甲醇，甲酰胺，Hoechst 33258，BSA，湿盒，荧光显微镜（Leica IX71）。
实验步骤：
- 细胞以3×104 cells/ml细胞数接种于24孔板中（内放置一盖玻片），每孔1 mL，37 ℃，5% CO2培养箱内培养24 h。用含0.4%FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。
- 终止细胞培养前，加入BrdU，37 ℃，孵育40 min。
- 吸弃培养液，玻片用PBS洗涤，静置5 min，吸出液体，重复5次。
- 甲醇/醋酸固定10 min。
- 经固定的玻片空气干燥，用0.3% H2O2-甲醇30 min灭活内源性氧化酶。
- 5%的BSA封闭。
- 甲酰胺100 ℃，5 min变性核酸。
- 冰浴冷却后PBS洗涤，加一抗即抗小鼠BrdU单抗，37 ℃，孵育2 h。
- 加入PBS洗涤，静置5 min，吸出液体，重复5次。加荧光二抗，37 ℃孵育1 h。
- 加入PBS洗涤，静置5 min，吸出液体，重复5次。Hoechst 33258染液，室温避光孵育30 min。
- 将细胞置于荧光显微镜下观察，随机计数5个高倍视野中拍照。
结果展示：
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