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双荧光素酶载体构建-载体选择


 

常用的双荧光素酶的表达质粒psicheck2/pmirGLO,这两个都是promega公司出品的

1) 这两个载体的元件大致相同,对于miRNA和靶基因或相关的萤光素酶实验来讲,没什么区别。

2)请注意一点 pmirGLO是Ruc作为内参,psicheck2是以luc作为内参

3)作为双萤光素酶载体,我们遇到过不同来源的质粒,内参的表达量参差不齐。萤光素酶的表达量又非常灵敏,

参照表达不正常是影响下游的结果分析的。所以来源可靠的载体非常重要。有质控的条件的实验室,实验结果才靠谱。

4)萤光素酶的载体构建和别的载体构建没啥区别,miRNA和靶基因的验证实验,我们一般是构建3UTR序列。那么有几种构建方式

  a.  构建3UTR全长 ,mut------土豪or自己构建

  b. 构建结合位点附近300-500bp的片段------经济实惠的选择方式

  c  构建预测到的几十个bp的片段------有文献也这样做,也OK

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 


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